青海PCR實驗室設計核心問題




admin
2020-07-21 05:28:56
閱讀





PCR實驗室設計核心問題PCR實驗室設計核心問題

                    
	
	PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染
。在實際工作中
，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染
；天然基因組DNA的污染
；試劑的污染以及標本間的污染
  。由于一旦發(fā)生污染
，實驗就必須停止
  ，直到找到污染源為止
  ，而且實驗結果必須作廢，需重新進行實驗
  。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣
  ，浪費人力物力。因此要避免污染
  ，首先應是預防
  ，而不是排除。
	實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設計及壓力控制 
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求
  ，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性
  ，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時
  ，要嚴格控制送
、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。 2.1試劑貯存和準備區(qū) 
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備
、試劑的分裝和主反應混合液的制備
。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域
。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)
，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控制
，本區(qū)并沒有嚴格的要求。 
	標本制備區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存
、核酸(RNA
、DNA)提取、貯存及其加入至擴增產(chǎn)物 分析區(qū) 試劑貯存和準備區(qū) 
標本制備區(qū) 擴增反應混合物配制和擴增區(qū) 緩 沖 區(qū) 傳遞窗
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓
，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染
。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染
，所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動
。
	擴增反應混合物配制和擴增區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增。此外
，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行
。 
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出
。為避免氣溶膠所致的污染
，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行
。
	擴增產(chǎn)物分析區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定
。 
本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源
，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域
。 
	
		此文章由網(wǎng)站本公司編寫
，轉載請注明出處。www.weo.xin