宜賓PCR實驗室設計核心問題




admin
2020-07-21 05:28:56
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PCR實驗室設計核心問題PCR實驗室設計核心問題

                    
	
	PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染
。在實際工作中
，常見的有以下幾種污染類型：擴增產物的污染
；天然基因組DNA的污染
；試劑的污染以及標本間的污染
。由于一旦發(fā)生污染
，實驗就必須停止
，直到找到污染源為止
，而且實驗結果必須作廢
，需重新進行實驗
。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣
，浪費人力物力。因此要避免污染
，首先應是預防
，而不是排除。
	實驗室空調通風系統(tǒng)設計及壓力控制 
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求
，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性
，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時
，要嚴格控制送
、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。 2.1試劑貯存和準備區(qū) 
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備
、試劑的分裝和主反應混合液的制備
。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域
。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內
，并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控制
，本區(qū)并沒有嚴格的要求
。 
	標本制備區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA
、DNA)提取
、貯存及其加入至擴增產物 分析區(qū) 試劑貯存和準備區(qū) 
標本制備區(qū) 擴增反應混合物配制和擴增區(qū) 緩 沖 區(qū) 傳遞窗
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染
。另外
，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區(qū)內不必要的走動
。
	擴增反應混合物配制和擴增區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增
。此外，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行
。 
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出
。為避免氣溶膠所致的污染
，應盡量減少在本區(qū)內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行
。
	擴增產物分析區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定
。 
本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓
，以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域
。 
	
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