雅安PCR實驗室設(shè)計核心問題




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2020-07-21 05:28:56
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PCR實驗室設(shè)計核心問題PCR實驗室設(shè)計核心問題

                    
	
	PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染
。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染
  ；天然基因組DNA的污染
  ；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染
  ，實驗就必須停止
  ，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢
  ，需重新進行實驗
  。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力
  。因此要避免污染
  ，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除
  。
	實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制 
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求
  ，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式
  。同時
  ，要嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求
  。 2.1試劑貯存和準備區(qū) 
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備
  、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)
  ，不得經(jīng)過其他區(qū)域
  。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑
  。 對與氣流壓力的控制
  ，本區(qū)并沒有嚴格的要求。 
	標本制備區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存
、核酸(RNA
、DNA)提取、貯存及其加入至擴增產(chǎn)物 分析區(qū) 試劑貯存和準備區(qū) 
標本制備區(qū) 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū) 緩 沖 區(qū) 傳遞窗
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓
，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染
。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染
，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動
。
	擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增。此外
，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行
。 
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓
，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染
，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動
。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。
	擴增產(chǎn)物分析區(qū) 
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定
。 
本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源
，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域
。 
	
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