拉薩PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)核心問(wèn)題

admin 2020-07-21 05:28:56 閱讀

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)核心問(wèn)題PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)核心問(wèn)題

PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避免污染

。在實(shí)際工作中，常見(jiàn)的有以下幾種污染類型：擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。由于一旦發(fā)生污染

，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直到找到污染源為止，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢

，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所以發(fā)生污染后再圍繞實(shí)驗(yàn)室來(lái)尋找污染源不但耗時(shí)而且繁瑣，浪費(fèi)人力物力

。因此要避免污染

，首先應(yīng)是預(yù)防，而不是排除

。

實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求

，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式

。同時(shí)

，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求

。 2.1試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備

、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)

，不得經(jīng)過(guò)其他區(qū)域

。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑

。對(duì)與氣流壓力的控制

，本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求。

標(biāo)本制備區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為樣本的保存

、核酸(RNA

、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
標(biāo)本制備區(qū) 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū) 緩沖區(qū) 傳遞窗
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?div id="4qifd00" class="flower right">

，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染

。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染

，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)

。

擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA擴(kuò)增。此外

，已制備的DNA模板 (來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行

。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出

。為避免氣溶膠所致的污染

，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行

。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定

。
本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓