廣安專(zhuān)業(yè)團(tuán)隊(duì)談PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室建設(shè)方案與規(guī)劃設(shè)計(jì)

。其內(nèi)有大量的儀器：鐵架臺(tái)、石棉網(wǎng)、酒精燈等實(shí)驗(yàn)工具。通常會(huì)配有化學(xué)藥品柜，藥柜里面有常用的化學(xué)藥品，比如：五水硫酸銅（CuSO4·5H2O，即膽礬），氫氧化鈉溶液，石灰石，鹽酸等。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是專(zhuān)門(mén)用于前PCR區(qū)的正壓活塞(piston)式移液管。
4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作。
所用的所有溶液都應(yīng)該沒(méi)有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾(still)的去離子水，用0.22μm過(guò)濾的，并且是高壓滅菌（fungus)。
在20到25貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類(lèi)的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
所有試劑和樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。
可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4，在實(shí)驗(yàn)（experiment)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。
如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮（consider)分裝保存夠一天的PCR成分。
作為一個(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過(guò)使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗(yàn)證(Experimental)你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。
陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。
當(dāng)做陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用最少數(shù)量的核酸。
由于必須有對(duì)照反應(yīng)，對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。
6、控制（control)污染的方法。
已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來(lái)消除一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線（Ultraviolet rays)，這種方法不能完全消除污染問(wèn)題，但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。
7、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個(gè)專(zhuān)門(mén)用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專(zhuān)門(mén)用于這一目的，決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)。