達(dá)州專業(yè)團(tuán)隊(duì)談PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室建設(shè)方案與規(guī)劃設(shè)計(jì)

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4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作。
所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾(still)的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌（fungus)。
在20到25貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。
可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4，在實(shí)驗(yàn)（experiment)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。
如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮（consider)分裝保存夠一天的PCR成分。
作為一個(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證(Experimental)你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物