云南PCR基因擴(kuò)增實驗室設(shè)計




admin
2020-07-07 05:02:17
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PCR基因擴(kuò)增實驗室設(shè)計PCR基因擴(kuò)增實驗室設(shè)計

                        




針對于PCR基因擴(kuò)增實驗室，本文主要從PCR基因擴(kuò)增實驗室名詞解釋
，PCR基因擴(kuò)增實驗室必須擁有的條件和PCR基因擴(kuò)增實驗室建立辦法流程幾大方面概要說明
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PCR基因擴(kuò)增實驗室名詞解釋：PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱
。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段
，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制
。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量
，其精確度高達(dá)納米級別，精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量
、是否復(fù)制
、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)
、是否必要服藥
、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何
、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據(jù)
。


基因擴(kuò)增實驗又稱PCR實驗
，其特點是能將微量的DNA大幅增加
，PCR是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域
，例如：艾滋病檢測
、乙型肝炎
、禽疫病、癌基因的檢測和診斷
，DNA指紋、個體識別
、親子鑒定及法醫(yī)物證
，動、植物檢疫
  ，動物及其衍生產(chǎn)品檢測
  ，動物飼料
、化妝品、食品衛(wèi)生檢測
，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等
。


一、PCR基因擴(kuò)增實驗室必須擁有的條件：

1
、必須在無菌無塵環(huán)境下進(jìn)行操作
；

2、檢測人員必須通過國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書
；

3
、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認(rèn)證
；

4
  、檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實驗室設(shè)置要求
；

5
、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實驗室
；


二
、PCR基因擴(kuò)增實驗室建立辦法流程：

1
、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)
；

2
、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會
。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行
。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報道
；

3、建立前PCR區(qū)
；

4
、PCR實驗室試劑的操作
；

5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物
；

6、控制污染的方法
；

7
、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)
，應(yīng)該留出一個專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方
；


PCR實驗室布局

PCR實驗室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)
、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間
，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置
。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志
，不能直通
，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗
。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)
，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)
，擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開
。實驗材料、試劑
、記錄紙
、筆、清潔材料等
，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)
，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動
。實驗室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動
。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈
，紫外燈的波長為254nm，每20㎡一支40W的紫外燈
。




驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

1
、試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要進(jìn)行試劑的制備
、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)
，不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)
，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑
。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱
、離心機(jī)
、加樣器、振蕩器等
。

對于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求
。

2
、樣品制備區(qū)：主要進(jìn)行樣品的保存、核酸(RNA
、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成
。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱
、生物安全柜、離心機(jī)
、加樣器、振蕩器
、恒溫水浴等
。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染
。

3
、擴(kuò)增區(qū)：主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外
，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴(kuò)增儀
、冰箱
、離心機(jī)、加樣器等
。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓
  ，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出
  。

4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定
  。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀
、洗板機(jī)
、加樣器和水浴箱等
。

本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域
。


PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流
、物流、人流與氣流
，形成單向流程的保護(hù)屏障
，避免實驗之間的相互干擾
，防止氣溶膠擴(kuò)散對實驗過程造成污染
。

PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性
，宜采用全送全排的氣流組織形式
，嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求
。


PCR實驗室裝飾

實驗室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固
、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡
；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵
、耐腐蝕
、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪
，材料應(yīng)滿足無縫隙
、無滲漏、光潔
、耐腐蝕的要求
。五、PCR實驗室注意事項

1
  、幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況，試劑準(zhǔn)備區(qū)
  、擴(kuò)增區(qū)
  、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
  ，空間可以相對小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱
  ，空間應(yīng)大一些
  。

2、試劑準(zhǔn)備區(qū)
  、樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器，以保證操作人員的安全
  。

3
  、PCR實驗室沒有嚴(yán)格的凈化要求，可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇
  。


總之PCR基因擴(kuò)增實驗室
  ，從實驗室設(shè)計，實驗室規(guī)劃到實驗室建設(shè)都是技術(shù)含量比較高的系統(tǒng)工程
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