西藏PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)




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2020-07-07 05:02:17
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PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

                        




針對(duì)于PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，本文主要從PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室名詞解釋，PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室必須擁有的條件和PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室建立辦法流程幾大方面概要說明
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PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室名詞解釋：PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱
。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)
  ，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級(jí)別
  ，精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量
、是否復(fù)制、是否傳染
、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥
、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物
、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù)
。


基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR實(shí)驗(yàn)
，其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法
，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域
，例如：艾滋病檢測、乙型肝炎
、禽疫病
、癌基因的檢測和診斷，DNA指紋
、個(gè)體識(shí)別
、親子鑒定及法醫(yī)物證，動(dòng)
、植物檢疫
，動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品檢測，動(dòng)物飼料
、化妝品
、食品衛(wèi)生檢測，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等
。


一
、PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室必須擁有的條件：

1
、必須在無菌無塵環(huán)境下進(jìn)行操作；

2
  、檢測人員必須通過國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書
  ；

3、必須通過國家臨床檢驗(yàn)中心的驗(yàn)收和認(rèn)證
  ；

4
  、檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實(shí)驗(yàn)室設(shè)置要求；

5
  、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實(shí)驗(yàn)室
  ；


二、PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室建立辦法流程：

1
  、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)
  ；

2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作
  ，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)
  。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行
  。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道
  ；

3、建立前PCR區(qū)
  ；

4
  、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作；

5
  、在前PCR區(qū)建立PCR混合物
  ；

6、控制污染的方法
  ；

7
  、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)
，應(yīng)該留出一個(gè)專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方
；


PCR實(shí)驗(yàn)室布局

PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)
、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊
，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置
。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的
，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通，如果緊密相連
，需安裝物品傳遞窗
。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)
，擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開
。實(shí)驗(yàn)材料、試劑
、記錄紙
、筆、清潔材料等
，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)
，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動(dòng)
。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)
，不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈
，紫外燈的波長為254nm
，每20㎡一支40W的紫外燈。




驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備

1
、試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要進(jìn)行試劑的制備
  、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)
  ，不得經(jīng)過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)
  ，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑
  。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱
  、離心機(jī)
  、加樣器、振蕩器等
  。

對(duì)于氣流壓力的控制
，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。

2
、樣品制備區(qū)：主要進(jìn)行樣品的保存
、核酸(RNA、DNA)提取
、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定DNA的合成
。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機(jī)
、加樣器
、振蕩器、恒溫水浴等
。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?div   id="d48novz"   class="flower left">
，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

3
、擴(kuò)增區(qū)：主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增
。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行
。本區(qū)主要設(shè)備有：擴(kuò)增儀
、冰箱、離心機(jī)
、加樣器等
。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出
。

4
、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀
、洗板機(jī)
、加樣器和水浴箱等。

本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓
，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域
。


PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流
、人流與氣流
，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾
，防止氣溶膠擴(kuò)散對(duì)實(shí)驗(yàn)過程造成污染
。

PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉污染的可能性
，宜采用全送全排的氣流組織形式
，嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求
。


PCR實(shí)驗(yàn)室裝飾

實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固
、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡
；墻體內(nèi)壁光潔
、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒
；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪
，材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏
、光潔
、耐腐蝕的要求。五
、PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)

1
、幾個(gè)區(qū)域的大小設(shè)置情況，試劑準(zhǔn)備區(qū)
、擴(kuò)增區(qū)
、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，空間可以相對(duì)小一些
，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱
，空間應(yīng)大一些。

2
、試劑準(zhǔn)備區(qū)
、樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器，以保證操作人員的安全
。

3
、PCR實(shí)驗(yàn)室沒有嚴(yán)格的凈化要求，可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇
。


總之PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室
，從實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃到實(shí)驗(yàn)室建設(shè)都是技術(shù)含量比較高的系統(tǒng)工程
，需要專業(yè)公司團(tuán)隊(duì)開展
，否則無法達(dá)到理想效果，我們科瓦特在PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室有著豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)
，如有需要做PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室報(bào)價(jià)的，急切想知道自己企業(yè)需要做的PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室價(jià)格
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