西寧PCR基因擴增實驗室設(shè)計




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2020-07-07 05:02:17
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PCR基因擴增實驗室設(shè)計PCR基因擴增實驗室設(shè)計

                        




針對于PCR基因擴增實驗室
，本文主要從PCR基因擴增實驗室名詞解釋
，PCR基因擴增實驗室必須擁有的條件和PCR基因擴增實驗室建立辦法流程幾大方面概要說明
，具體更多相關(guān)技術(shù)知識務(wù)必關(guān)注我們的網(wǎng)站或者直接聯(lián)系我們。


PCR基因擴增實驗室名詞解釋：PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱
。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段
，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)
，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量
，其精確度高達(dá)納米級別，精確檢測乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量
、是否復(fù)制
、是否傳染
、傳染性有多強、是否必要服藥
、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何
、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據(jù)
。


基因擴增實驗又稱PCR實驗
，其特點是能將微量的DNA大幅增加
，PCR是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法
，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域
，例如：艾滋病檢測
、乙型肝炎、禽疫病
、癌基因的檢測和診斷，DNA指紋
、個體識別、親子鑒定及法醫(yī)物證
，動
  、植物檢疫
  ，動物及其衍生產(chǎn)品檢測
  ，動物飼料
  、化妝品
  、食品衛(wèi)生檢測
  ，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等
  。


一、PCR基因擴增實驗室必須擁有的條件：

1
  、必須在無菌無塵環(huán)境下進(jìn)行操作
  ；

2、檢測人員必須通過國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書
  ；

3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認(rèn)證
；

4
、檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實驗室設(shè)置要求；

5
、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實驗室
；


二
、PCR基因擴增實驗室建立辦法流程：

1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)
；

2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作
，這樣增加了樣品之間污染的機會
。為了避免這一問題
，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報道
；

3
、建立前PCR區(qū)；

4
、PCR實驗室試劑的操作
；

5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物
  ；

6
  、控制污染的方法
  ；

7、后PCR區(qū)PCR完成以后
  ，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方
  ；


PCR實驗室布局

PCR實驗室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)
  、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊
  ，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置
  。不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的
  ，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通
，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗
。前兩區(qū)為擴增前區(qū)
，后兩區(qū)為擴增后區(qū)
，擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開
。實驗材料
、試劑、記錄紙
、筆、清潔材料等
，只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)
，不得逆向流動
。實驗室的氣流也應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)
，不得逆向流動
。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈
，紫外燈的波長為254nm，每20㎡一支40W的紫外燈
。




驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

1、試劑準(zhǔn)備區(qū)：主要進(jìn)行試劑的制備
、分裝和主反應(yīng)混合液的制備
。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)
  ，不得經(jīng)過其它區(qū)域
。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑
。本區(qū)主要設(shè)備有天平
、冰箱、離心機
、加樣器、振蕩器等
。

對于氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求
。

2、樣品制備區(qū)：主要進(jìn)行樣品的保存
、核酸(RNA
、DNA)提取
、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成
。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱
、生物安全柜
、離心機
、加樣器、振蕩器
、恒溫水浴等
。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓
，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

3、擴增區(qū)：主要進(jìn)行DNA擴增
。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行
。本區(qū)主要設(shè)備有：擴增儀、冰箱
、離心機
、加樣器等
。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓
，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出
。

4、擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物的測定
。本區(qū)主要設(shè)備有酶標(biāo)儀
、洗板機
、加樣器和水浴箱等。

本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓
，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。


PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流
、物流
、人流與氣流
，形成單向流程的保護(hù)屏障，避免實驗之間的相互干擾
，防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。

PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求
，但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式
，嚴(yán)格控制送
、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求
。


PCR實驗室裝飾

實驗室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固
、氣密性好
；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔
、不積塵
、耐腐蝕
、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪
，材料應(yīng)滿足無縫隙
、無滲漏
、光潔、耐腐蝕的要求
。五、PCR實驗室注意事項

1、幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況
，試劑準(zhǔn)備區(qū)
、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)
，空間可以相對小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱
，空間應(yīng)大一些。

2
  、試劑準(zhǔn)備區(qū)
  、樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器
  ，以保證操作人員的安全
。

3、PCR實驗室沒有嚴(yán)格的凈化要求
，可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇
。


總之PCR基因擴增實驗室
，從實驗室設(shè)計，實驗室規(guī)劃到實驗室建設(shè)都是技術(shù)含量比較高的系統(tǒng)工程
，需要專業(yè)公司團隊開展
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