內江PCR基因擴增實驗室設計




admin
2020-07-07 05:02:17
閱讀





PCR基因擴增實驗室設計PCR基因擴增實驗室設計

                        




針對于PCR基因擴增實驗室，本文主要從PCR基因擴增實驗室名詞解釋
  ，PCR基因擴增實驗室必須擁有的條件和PCR基因擴增實驗室建立辦法流程幾大方面概要說明
，具體更多相關技術知識務必關注我們的網站或者直接聯系我們
。


PCR基因擴增實驗室名詞解釋：PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱
  。是一種分子生物學技術
，用于放大特定的DNA片段
，可看作生物體外的特殊DNA復制
。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)
，能迅速掌握患者體內的病毒含量
，其精確度高達納米級別，精確檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量
、是否復制
、是否傳染
、傳染性有多強、是否必要服藥
、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物
、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據
。


基因擴增實驗又稱PCR實驗
，其特點是能將微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法
，廣泛應用于生物學各個領域
，例如：艾滋病檢測、乙型肝炎
、禽疫病
、癌基因的檢測和診斷，DNA指紋
、個體識別
、親子鑒定及法醫(yī)物證，動
、植物檢疫
，動物及其衍生產品檢測，動物飼料
、化妝品
、食品衛(wèi)生檢測，轉基因作物與轉基因微生物檢測等
。


一
、PCR基因擴增實驗室必須擁有的條件：

1、必須在無菌無塵環(huán)境下進行操作
；

2
、檢測人員必須通過國家臨檢中心業(yè)務培訓并取得合格證書；

3
、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證
；

4、檢測設備必須符合標準PCR熒光實驗室設置要求
；

5
、必須擁有標準的的PCR熒光實驗室；


二
、PCR基因擴增實驗室建立辦法流程：

1
、建立樣品準備區(qū)；

2
、樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作
，這樣增加了樣品之間污染的機會
。為了避免這一問題，反轉錄一步可以在樣品準備區(qū)進行
。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道
；

3、建立前PCR區(qū)
；

4
、PCR實驗室試劑的操作；

5
、在前PCR區(qū)建立PCR混合物
；

6、控制污染的方法
；

7
、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數據
，應該留出一個專門用于反應后處理樣品的地方
；


PCR實驗室布局

PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)
、擴增區(qū)和擴增產物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設有專用走廊
，各工作區(qū)域應設緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置
。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的
，各工作區(qū)有明顯的標志
，不能直通
，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗
。前兩區(qū)為擴增前區(qū)
，后兩區(qū)為擴增后區(qū)，擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開
。實驗材料
、試劑、記錄紙
、筆
、清潔材料等，只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)
，即從試劑準備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)
，不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū)
，不得逆向流動
。各工作區(qū)頂部應安裝紫外燈
，紫外燈的波長為254nm，每20㎡一支40W的紫外燈
。




驗室各區(qū)功能及主要設備

1
、試劑準備區(qū)：主要進行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備
。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)
，不得經過其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內
，并在本區(qū)內制備成所需的試劑
。本區(qū)主要設備有天平、冰箱
、離心機
、加樣器、振蕩器等
。

對于氣流壓力的控制
，本區(qū)并沒有嚴格的要求。

2
、樣品制備區(qū)：主要進行樣品的保存
、核酸(RNA、DNA)提取
、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成
。本區(qū)主要設備有冰箱、生物安全柜
、離心機
、加樣器、振蕩器
、恒溫水浴等
。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染
  。

3
  、擴增區(qū)：主要進行DNA擴增。此外
  ，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行
  。本區(qū)主要設備有：擴增儀、冰箱
  、離心機
  、加樣器等。

本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓
，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出
。

4
、擴增產物分析區(qū)：擴增產物的測定。本區(qū)主要設備有酶標儀
、洗板機
、加樣器和水浴箱等。

本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓
，以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域
。


PCR實驗室通風系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應具備單向的實驗工藝流、物流
、人流與氣流
，形成單向流程的保護屏障，避免實驗之間的相互干擾
，防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染
。

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性
，宜采用全送全排的氣流組織形式
，嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求
。


PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結構應牢固
、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡
；墻體內壁光潔
、不積塵、耐腐蝕
、易清洗消毒
；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應滿足無縫隙
  、無滲漏
  、光潔
  、耐腐蝕的要求
  。五、PCR實驗室注意事項

1
  、幾個區(qū)域的大小設置情況
  ，試劑準備區(qū)、擴增區(qū)
  、擴增產物分析區(qū)
  ，空間可以相對小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱
  ，空間應大一些
  。

2
  、試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)設緊急洗眼器
  ，以保證操作人員的安全
  。

3、PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求
  ，可以根據用戶的使用情況和資金的投入選擇
  。


總之PCR基因擴增實驗室，從實驗室設計
  ，實驗室規(guī)劃到實驗室建設都是技術含量比較高的系統(tǒng)工程