PCR實驗室裝修要求PCR
實驗室裝修要求
1
、
PCR實驗室平面布局 PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域:試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)
、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)
、擴增產物分析區(qū)
。為避免交叉污染
,進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)
。 各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
2
、實驗室空調通風系統(tǒng)設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求
,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性
,宜采用全送全排的氣流組織形式
。同時,要嚴格控制送
、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求
。
2.1
、試劑貯存和準備區(qū)
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備
、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)
,不得經過其他區(qū)域
。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內
,并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑
。 對與氣流壓力的控制
,本區(qū)并沒有嚴格的要求
。
2.2
、標本制備區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存
、核酸(RNA
、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成
。 本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染
。另外
,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染
,所以應避免在本區(qū)內不必要的走動。
2.3
、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增
。此外
,已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。 本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓
,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出
。為避免氣溶膠所致的污染
,應盡量減少在本區(qū)內的不必要的走動
。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行
。
2.4
、擴增產物分析區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定
。 本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓
,以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域
。
3、污染的預防與控制
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染
。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染
;天然基因組DNA的污染
;試劑的污染以及標本間的污染
。由于一旦發(fā)生污染
,實驗就必須停止,直到找到污染源為止
,而且實驗結果必須作廢
,需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣
,浪費人力物力。因此要避免污染
,首先應是預防,而不是排除
。
3.1
、工作區(qū)域的嚴格劃分
(1)各個實驗區(qū)域設置合理;
(2)各個實驗區(qū)域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等)
,以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品
、試劑等發(fā)生混淆。
3.2
、合理的系統(tǒng)設置
(1)合理的空調通風系統(tǒng)設置
,盡量采用全送全排的空調系統(tǒng);
(2)嚴格的氣流壓力控制
,保證不同的實驗區(qū)內不同的壓力要求。
3.3
、 規(guī)范的操作
(1)擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作
;
(2)在實驗操作過程中
,操作者必須戴手套
,并經常更換
。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施
;
(3)清潔工作及時
、正確
。實驗工作結束后
,必須立即對本區(qū)進行清潔
。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外
,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。
3.4
、嚴格的管理
(1)嚴格控制進出實驗室的人員
。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室
,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門
;
(2)盡量減少在實驗區(qū)內不必要的走動以減少交叉污染的可能性
。
(3)擴增產物分析區(qū)是最主要的擴增產物污染來源
,廢液不能在實驗室中傾倒
,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉
,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理
,如焚燒等
;
(4)擴增產物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質
,應特別注意實驗人員的安全防護
。
3.5
、完備的實驗室配套設施
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件
,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器
,如超凈工作臺
、離心機、加樣器等
。
以上為本公司整理提供
,實驗室設計、建設
、裝修
、改造、通風
、凈化
、水電氣、三廢處理
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