四川PCR技術(shù)在基層疾控中心實驗室的應(yīng)用案例




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2020-07-23 05:07:53
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PCR技術(shù)是一種快速DNA片段擴(kuò)增技術(shù)，具有高靈敏性
、高特異性
  、簡便
、快速以及對標(biāo)本質(zhì)量要求較低的特點
，已經(jīng)成為一種對標(biāo)本中的特定DNA片段進(jìn)行研究（research)和檢測鑒定的重要方法，被廣泛(extensive)用于病毒學(xué)診斷
，尤其是病毒性疾病的早期診斷[1]
。Real-time PCR是新研制出的一種核酸定量技術(shù)，該技術(shù)是在RT-PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針來實現(xiàn)其定量功能的
，在PCR反應(yīng)系統(tǒng)中引入了熒光標(biāo)記探針具有高靈敏性
、高特異性和高精確性的特點。PCR 技術(shù)在基層疾控中心的開展
，提高了基層實驗（experiment)室的技術(shù)能力
，為流行病疫情的流行水平和變化趨勢(variation tendency)提供科學(xué)有效的數(shù)據(jù)，為我市的疾病防控工作能力提供了技術(shù)支撐
，也為分子生物學(xué)在基層實驗室開展研究奠定基礎(chǔ)
，在現(xiàn)代疾病預(yù)防控制事業(yè)中起到了巨大的作用。
1 方法
1.1 吳忠市疾控中心申請建立PCR實驗室
。
吳忠市PCR實驗室的建立有其歷史必要性
。的5月，還沒有特效治療的藥物
，尚無有效的預(yù)防疫苗
，相關(guān)的疫苗研發(fā)正在進(jìn)行之中[2]。甲型H1N1流感疫情的蔓延和流行趨勢
，引起全球人民的高度恐慌
。我國密切關(guān)注甲型H1N1流感的發(fā)生和傳播，各級疾控中心加強監(jiān)測和檢測
，及時應(yīng)對疫情的發(fā)生
。面對可能（maybe)大規(guī)模爆發(fā)的流感疫情，我們的實驗室檢測工作已經(jīng)無法解決對疫情病毒的確診工作
，無法滿足這種空前危機(jī)的局勢,擴(kuò)大流感檢測實驗室
  ，應(yīng)對疫情危機(jī)已經(jīng)是迫在眉睫的問題。實驗室檢測是確診流感病例的重要依據(jù)
  ，為進(jìn)一步加強疫情監(jiān)測
  ，嚴(yán)防疫情擴(kuò)散，需逐步將現(xiàn)有流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室擴(kuò)大到所有地市級疾病預(yù)防控制（control)中心
  ，因此建立基層PCR實驗室是這種歷史時期的必然趨勢
  。
PCR實驗室是分子生物實驗室
  ，因其技術(shù)參數(shù)條件高，造價昂貴
  ，開展工作耗資巨大
  ，因此很難在基層實驗室建立。
  ，在特定的歷史時期
  ，寧夏吳忠市疾控中心積極向上級部門和地方政府匯報建立PCR實驗室的必要性，并申請項目資金
  ，申請審批在吳忠市疾控中心建立PCR實驗室
  。
1.2 RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)在基層疾控中心實驗（experiment)室的運用。大學(xué)實驗室國家科技創(chuàng)新體系的重要組成部分
  ，高等學(xué)校創(chuàng)新性人才的培養(yǎng)基地
  ，在高校學(xué)科建設(shè)、科技創(chuàng)新
  、人才培養(yǎng)和培育國家級科研基地中發(fā)揮著越來越重要的作用
  。
寧夏吳忠市PCR實驗（experiment)室按照標(biāo)準(zhǔn)配置了普通PCR擴(kuò)增儀、定量Real-time實時熒光PCR儀
  、電泳儀
、凝膠(gelate)成像儀、倒置顯微鏡
、A2型生物安全柜
、B2型生物安全柜、超凈工作臺
、低溫冷凍離心機(jī)、培養(yǎng)箱
、高壓鍋
、-70攝氏度低溫冷凍冰箱、純水儀等儀器設(shè)備30余件
。動物實驗室通過對動物本身生命現(xiàn)象的研究
，進(jìn)而推用到人類，探索人類的生命奧秘
，控制人類的疾病和衰老
，延長人類的壽命。隨著醫(yī)學(xué)生物科學(xué)的突飛猛進(jìn)發(fā)展
，認(rèn)識到公害問題不僅已成為糧食
、人口、老年人等的重大社會問題
，而且還涉及到地球上生活著的動物生存問題
。
在PCR實驗（experiment)室建設(shè)同時
，吳忠市疾控中心先后派出2名專業(yè)技術(shù)人員到寧夏自治區(qū)疾控中心病毒實驗室進(jìn)行了專項培訓(xùn)（作用:知識傳遞、技能傳遞
、標(biāo)準(zhǔn)傳遞)
，通過考核，獲得了上崗證書
。
11月22日
，經(jīng)過寧夏回族自治區(qū)疾控中心專家的現(xiàn)場流感樣盲樣的考核驗收，達(dá)標(biāo)后以RT-PCR技術(shù)開展流感核酸檢測工作開始正式投入使用
，標(biāo)志著PCR技術(shù)首次在基層實驗室的開展
。
2 結(jié)果
2.1 在國家和地方政府的大力支持下，在單位領(lǐng)導(dǎo)的努力和各位專家的指導(dǎo)下
  ，吳忠市PCR實驗室于同年11月份建成
  。
寧夏吳忠市PCR實驗室嚴(yán)格按照生物安全Ⅱ級的要求在市疾控中心進(jìn)行設(shè)計和建設(shè)。 PCR技術(shù)基本原理就是將感樣本的特異基因組核酸基因片段通過聚集
  、提取
、擴(kuò)增，分析其擴(kuò)增產(chǎn)物來確定流感病毒的類型
。完成一組PCR實驗
，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理
、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個實驗過程[3]
。
寧夏吳忠市疾控中心的PCR實驗室在環(huán)境結(jié)構(gòu)上是組合形式的PCR實驗室，是指完成PCR四個實驗過程的實驗和用房是相鄰布置的
，組成獨立實驗區(qū)域的形式
。實驗室設(shè)有PCR內(nèi)部專用走廊。實驗室間有試劑配制室
、樣品處理室
、核酸擴(kuò)增室及核酸擴(kuò)增產(chǎn)物分析(Analyse)室組成。各室在入口處設(shè)置有緩沖間
，以減少室內(nèi)外空氣交換
。我中心的PCR實驗室是通過獨立的送排風(fēng)系統(tǒng)，控制（control)氣流方向和壓差
，氣流由清潔區(qū)流向污染區(qū) 
。
2.2 目前，吳忠市PCR實驗室運用RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)承擔(dān)來自哨點醫(yī)院（吳忠市人民醫(yī)院）的發(fā)熱病人的流感樣樣本的常規(guī)檢測
，同時還擔(dān)負(fù)著整個吳忠市轄區(qū)暴發(fā)集體發(fā)熱疫情的現(xiàn)場快速檢測及實驗室確診檢測工作
，確診流感病毒類型及分型。運用Real-time PCR技術(shù)和雙重Real-time PCR技術(shù)對本手足口病樣核酸鑒定和分型
。對流感樣和手足口病樣核酸檢測
，吳忠市PCR實驗室檢測的陽性樣品
，全部都及時送到寧夏回族自治區(qū)疾控中心病毒科實驗室復(fù)核（審查核對)，結(jié)果一致
，沒有出現(xiàn)結(jié)果異?div   id="4qifd00"   class="flower right">
；蛘呤遣环锨闆r。國家流感中心在10月和10月
，兩次組織對國家流感網(wǎng)絡(luò)絡(luò)實驗室分別進(jìn)行為數(shù)10份的流感盲樣標(biāo)本分型考核
，盲樣考核樣品由國家流感中心統(tǒng)一提供。吳忠市疾控中心流感網(wǎng)絡(luò)實驗室的考核盲樣結(jié)果符合率均為100%
，順利通過
，這是對工作人員盡快掌握RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)的肯定。吳忠市PCR實驗室自建成開展工作以來
，無安全事故發(fā)生
，沒有檢測結(jié)果錯誤情況，一切運轉(zhuǎn)正常
。
3 結(jié)論：
3.1 吳忠市PCR實驗（experiment)室運用RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)檢測包括甲型H1N1流感在內(nèi)的各種流感病毒核酸
，及時確診流感病毒的類型及其亞型，為流感疫情的流行水平和變化趨勢(variation tendency)提供科學(xué)有效的數(shù)據(jù)
，為提高我市的疾病防控工作能力提供了技術(shù)支撐
。化學(xué)實驗室人們利用它們來探索學(xué)習(xí)物質(zhì)及其變化的奧秘
。進(jìn)入化學(xué)實驗室之前一定要仔細(xì)閱讀實驗室規(guī)則
，嚴(yán)格按照規(guī)則操作。因為很多的化學(xué)藥品對人體的危害性非常大
，對環(huán)境也有較大污染
。
3.2 在吳忠市PCR實驗（experiment)室運用熒光定量PCR技術(shù)和雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)檢測手足口病核酸分型，暴發(fā)疫情快速確診腸道病毒類型
，掌握EV71和CoxA16感染流行（Prevalent)特征
，為疫情的流行水平和變化趨勢提供科學(xué)有效的數(shù)據(jù)，同時為臨床診斷以及制定預(yù)防措施提供依據(jù)
。
3.3 吳忠市PCR實驗室
，作為一個分子診斷實驗室
，能夠為將來開展PCR技術(shù)支持的任何其它病毒核酸檢測提供實驗環(huán)境
，在今后的發(fā)展中將會發(fā)揮其最大效應(yīng)，也許在不久的將來
，丙肝病毒
、艾滋病毒、乙腦病毒
、輪狀病毒
、流感病毒
、麻疹(measles)病毒、腺病毒
、EB病毒
、風(fēng)疹病毒等需要PCR技術(shù)支持病毒核酸檢測都能夠在吳忠市疾控中心這樣的基層PCR實驗室完成。PCR技術(shù)在吳忠市疾控中心實驗室的運用
，提高了實驗室的技術(shù)能力
，也為分子生物學(xué)在基層實驗室開展研究奠定基礎(chǔ)。
。
寧夏吳忠市PCR實驗室的建成啟用
，極大地提高了我市流感傳染病和手足口病診斷的及時性和準(zhǔn)確性，對有效預(yù)防控制流感病毒和手足口病傳染病發(fā)揮重要的指導(dǎo)性作用
。RT-PCR技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)在基層疾控中心實驗室的運用
，吳忠市疾控中心實驗室首次具備核酸檢測能力，提高了基層實驗室的技術(shù)能力
，為流行（Prevalent)病疫情的流行水平和變化趨勢提供科學(xué)有效的數(shù)據(jù)
，為我市的疾病防控工作能力提供了技術(shù)支撐，也為分子生物學(xué)在基層實驗室開展研究奠定基礎(chǔ)
。建立基層PCR實驗室不盡是基層實驗室能力建設(shè)的一個巨大飛躍
，更是在現(xiàn)代疾病預(yù)防控制事業(yè)中起到了巨大的作用。